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    對培養的NK細胞不滿意,是培養基的問題,還是試劑盒的問題?
    點擊次數:157 發布日期:2019-3-13  來源:本站 僅供參考,謝絕轉載,否則責任自負

    對培養的NK細胞不滿意,是培養基的問題,還是試劑盒的問題?

     

    關于NK細胞培養的問題,不能只認為培養基不好或試劑盒不好,很多客戶在培養過程中遇到接種密度的問題、補液程序的問題、血漿問題以及樣本的問題,所以影響NK細胞培養效果的因素非常之多,那么在細胞培養不太滿意的情況下,我們應該按以下原則進行排查。
     

    1、血液樣本問題

    首先確認樣本的狀態,理論上來講外周血樣本應在抽取的6個小時內進行細胞分離,這個時段細胞是處于最好的狀態,所以培養前請確認樣本是否新鮮,以及血液是否出現溶血現象

    血液樣本保存時間過長,會導致單核細胞無法成功誘導激活。

    血液如在運送過程中溶血,則可能導致血漿分離出現問題,無法后期培養添加。

    如用凍存的單個核細胞復蘇培養,請確認復蘇單個核細胞的活率及狀態。
     

    2、接種密度問題

    請確保接種的密度在1.5-2x106cells/m L,過低密度會導致細胞前期增殖緩慢,無法達到補液要求。
     

    3、血漿的處理及添加方式

    (1)血漿必須要56℃滅活30min,除去多余的纖維蛋白,如有可能冷凍后離心,保證細胞培養時添加的血漿不會有纖維蛋白析出粘連正常細胞。

    (2)如有可能有更多剩余的血漿,可在后期補入,對于有些狀態較差的樣本會有更好的培養效果。
     

    4、補液原則問題

    NK培養受樣本差異性影響會很大,所以沒有一個固定的補液程序可以指導各種不同的樣本。

    有的樣本激活迅速,生長快速,補液就相對容易,也更好擴增,可有的樣本前期就長的較慢,如遇到腫瘤患者晚期年老的病人,更是難上加難,所以針對不同的樣本,我們應該有不同的應對原則:

    (1)首先7天以后的補液原則是補液后細胞密度應在0.5-0.8x106cells/m L,如密度達不到,請延遲一天后再進行補液,否則當你細胞補液密度過低時,好的樣本可以長起來,那差的樣本就會逐漸凋亡,無法繼續培養。

    (2)對于差的樣本,適當增加血漿的添加次數,可以得到更好的效果,比如標準程序需要加3-4次血漿,那么有可能的話你可以加到5次。
     

    5、操作原因

    (1)補液培養基的溫度

    培養基補液前應提前預溫,過冷的培養基會導致細胞應激反應,出現絮狀物;

    (2)培養箱環境的劇烈變化

    培養箱異常,溫度及二氧化碳濃度變化較大會導致細胞死亡,出現絮狀物;

    (3)細菌、真菌、支原體污染

    受到細菌、真菌、支原體污染的細胞生長非常緩慢,甚至不生長;

    (4)因子試劑盒經過了反復的凍融

    反復凍融會大大降低因子的活性,激活、誘導、擴增等環節都會出現問題,達不到最優的效果。

    來源:友康恒業生物科技(北京)有限公司
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